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《动物学研究》 2006年01期
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牛胎儿成纤维细胞的组织块贴附法分离培养与电穿孔法基因转染

杨东山  杜晨光  高飞  旭日干  
【摘要】:为获得转基因克隆牛的供体细胞,采用组织块贴附培养的方法分离培养牛胎儿皮肤成纤维细胞,经2~3次传代纯化,绘制生长曲线,分别分析体外传代培养10代以内和20代以上细胞的核型特征。分别采用800、900、1000V/cm和1、5、10、15和20ms的参数组合,将线性化的带有新霉素抗性和绿色荧光蛋白双重筛选标记的人胰岛素原乳腺特异表达载体pNEI电穿孔转入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,经800μg/mL G418筛选2周,继续以300μg/mL G418扩大培养2~3代,取部分筛选后的细胞进行PCR检测结果表明,体外培养的牛胎儿成纤维细胞生长旺盛,体外传代20次后核型未发生改变;转染后24~48h在荧光镜下检测各组均可观察到绿色荧光表达,筛选后各组克隆形成数以900V/cm和5ms组最多;PCR检测得到了预期条带,说明目的基因已经成功导入。分离得到的牛胎儿耳成纤维细胞有可能作为体细胞核移植的供体,进行转基因克隆研究。

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 刘敏;阳离子脂质体转染家蚕细胞技术体系的建立[D];西南大学;2007年
2 张敏;牛3种体细胞体外培养研究[D];华中农业大学;2006年
【同被引文献】
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1 沈慧玲,陈子兴,王玮,段卫明,傅建新;电穿孔法基因转染悬浮细胞条件的优化[J];苏州大学学报(医学版);2004年01期
2 杨信怡,游雪甫,蒋建东;溶葡球菌酶的抗菌活性研究进展[J];中国新药杂志;2005年09期
3 程黎阳,宋新明,高毅,杨继震;Lipofectin介导DNA聚合酶α反义寡核苷酸抑制人胃癌细胞生长[J];广东医学;2000年01期
4 陈凌,郑祥雄;CD40发夹siRNA真核表达载体构建及其对CA46细胞CD40表达的影响[J];细胞与分子免疫学杂志;2005年02期
5 陈杰斌;许从峰;虞勇;李丽;李双杰;陈瑞珍;杨英珍;;CVB3-VP1 siRNA对CVB3复制的抑制作用[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年03期
6 陈文,谌贻璞,李安,程虹,董葆,邹万忠,赵世萍,付桂香;马兜铃酸肾病的临床与病理表现[J];中华医学杂志;2001年18期
7 罗燕,郭万柱,刘艳丽,殷华平;猪细小病毒SC-1株VP2基因的克隆及生物信息学分析[J];动物医学进展;2005年08期
8 谭业辉,王畅,王冠军;低剂量辐射对白血病模型小鼠治疗作用研究[J];吉林大学学报(医学版);2002年01期
9 翟少伟,谷艳钗;转基因动物的研究进展和前景展望[J];当代畜牧;2000年06期
10 严泉剑;动物转基因与核移植技术的新进展[J];动物医学进展;2002年03期
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1 彭华;许尚忠;昝林森;;中国黄牛线粒体DNA ND5基因PCR-RFLP分析[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
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1 潘求真;利用体细胞核移植技术生产转基因山羊的研究[D];东北农业大学;2002年
2 王林枫;光照和埋植褪黑激素对内蒙古白绒山羊含氮物质分配和产绒性能的影响及调控的研究[D];内蒙古农业大学;2005年
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4 葛丽;卵丘细胞对小鼠卵母细胞胞质成熟的作用及机理的研究[D];山东农业大学;2006年
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1 王端明;荷斯坦奶牛、罗米莉羊供核体细胞系的建立及生物学特性研究[D];新疆农业大学;2005年
2 石莺;RORα在胃癌组织及DADS诱导的胃癌细胞中差异表达的初步研究[D];南华大学;2007年
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5 于永生;罗晓彤;曹阳;张立春;王晓阳;;牛耳皮肤成纤维细胞的分离培养及转染线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因研究[J];河北农业大学学报;2011年04期
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7 夏占峰;关统伟;阮继生;黄英;张利莉;;艾丁湖沉积物放线菌多样性[J];微生物学报;2011年08期
8 王海鹏;高杰;张小平;樊志强;杨彤涛;范清宇;马保安;;miR-30a-5p在人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中的生物学功能及验证[J];中国医药导报;2011年16期
9 张丽;;鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验[J];山东畜牧兽医;2011年07期
10 杨茂生;裴晓红;朱冠群;梁应林;熊如秀;;棕色固氮菌分离鉴定与初步应用研究[J];现代农业科技;2011年11期
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1 都启晶;庞倩;文心田;黄小波;曹三杰;;副猪嗜血杆菌SC-1株的分离培养及鉴定[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
2 吴侠;吴应积;罗奋华;于海泉;旭日干;;大鼠精原干细胞的分离及体外培养的研究[A];第十届全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2005年
3 肖成蕊;王伟利;孟日增;孟庆峰;宋战昀;刘和平;蔡阳;罗雁非;王宁;于师宇;;4种病原菌免疫富集刷快速检测方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
4 李天伟;芮荣;宋旭东;马琪;宋大鲁;;南京地区健康犬被毛真菌的分离培养与菌群调查[A];全国兽医外科学第13次学术研讨会、小动物医学第1次学术研讨会暨奶牛疾病第3次学术讨论会论文集[C];2006年
5 廖波;张克英;陈代文;余冰;;猪肝细胞的分离培养和AMPK活性调控的研究[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会——第九届学术研讨会论文集[C];2004年
6 赵慧英;温叶飞;曹洪国;华松;尹宝英;张涌;;胎鼠中枢神经系统神经干细胞的分离培养和诱导分化[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
7 吾甫尔·米吉提;刘丽燕;阿不都拉·阿巴斯;;绿皮地卷(Peltigera aphthosa)共生藻细胞的分离培养[A];中国第六届海峡两岸菌物学学术研讨会论文集[C];2004年
8 张国华;屈长青;杨公社;;猪前体脂肪细胞的分离培养[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
9 刘仕勇;张可成;扬辉;何家全;吕胜青;;神经干细胞的分离培养及其鉴定[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年
10 张炳强;于丽;管英俊;陈艳春;赵春艳;;人脐血间质干细胞的分离培养及生物学特性[A];2007年中国解剖学会第十届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 王新;昆明植物所首次成功培养地衣型子囊菌[N];农民日报;2007年
2 记者 徐敏;用分子方法解析人体肠道菌群[N];解放日报;2006年
3 李旻本报实习记者 甘勃;基因敲除开启生命科学新纪元[N];大众科技报;2007年
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1 庞全海;山羊骨髓间充质干细胞的分离培养及体外分化潜能的研究[D];西北农林科技大学;2005年
2 郭志林;小鼠、兔和牛胚胎干细胞分离培养及其向神经样细胞的分化[D];西北农林科技大学;2008年
3 史明艳;山羊毛囊干细胞及组织工程皮肤构建研究[D];西北农林科技大学;2006年
4 屈长青;猪脂肪间充质干细胞的分离培养及体外诱导分化研究[D];西北农林科技大学;2006年
5 王彤;胚胎干细胞的分离培养和诱导分化为神经细胞的实验研究[D];中国医科大学;2005年
6 张学明;人gdnf在牛胎儿成纤维细胞β-casein基因座的定位整合及基因打靶克隆囊胚的制备[D];内蒙古大学;2009年
7 余树民;小鼠胚胎干细胞建系的研究[D];西北农林科技大学;2007年
8 曹鸿国;小鼠体细胞克隆胚的ES细胞研究[D];西北农林科技大学;2005年
9 田海滨;小鼠和山羊胚胎干细胞建系及其分化为神经元细胞的基础研究[D];山东大学;2005年
10 李云涛;脐带血多能成体祖细胞生物学特性及分离相关影响因素的研究[D];中国协和医科大学;2006年
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1 田青;丝状支原体山羊亚种PG3分离培养及LppA基因克隆[D];西南大学;2006年
2 杜永凤;山羊传染性胸膜肺炎病原的分离鉴定[D];四川农业大学;2006年
3 王翠玲;小鼠精原细胞分离及体外分化培养的研究[D];西北农林科技大学;2007年
4 崔晓华;猪圆环病毒2型吉林株的分离与鉴定及ORF2基因序列分析[D];吉林农业大学;2006年
5 吴杭格;新生猪胰腺干细胞的分离培养与鉴定[D];吉林农业大学;2008年
6 张弛;热应激对牛体细胞克隆胚胎早期发育的影响[D];西北农林科技大学;2007年
7 张彦婷;布鲁菌的分离鉴定及OMP25基因的克隆[D];内蒙古农业大学;2009年
8 杨美玲;转过表达和低表达胰岛素样生长因子Ⅰ基因牛成纤维细胞系的制备[D];内蒙古大学;2009年
9 刘大勇;山羊皮肤干细胞及绿色荧光蛋白基因转染研究[D];西北农林科技大学;2006年
10 金立方;小鼠胚胎干细胞和胚胎生殖细胞的分离培养[D];西北农林科技大学;2004年
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