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飞蝗总DNA的抽提及其RAPD分析条件的摸索

张民照  康乐  
【摘要】:通过试验寻求得到一种快速、简便抽提飞蝗 (Locustasp .)总DNA的方法 ,使每头雄性和雌性成虫分别可以得到 5 0和 10 0 μg的总DNA。所得到的总DNAOD2 60 /OD2 80 为 1 5~ 2 2 ,分子量 45kb。为了获得高分子量的DNA产品 ,使RPAD结果具重复性 ,酚氯仿抽提后的DNA沉淀用灭菌Tip头挑出 ,而不用离心收集。对各种分析条件如模板、Taq酶、dNTP及引物的浓度、不同的PCR仪、反应管进行了比较试验 ,发现在一定的范围内 ,它们对RAPD结果影响不大。用优化的试验条件对我国 3个飞蝗亚种 5个地理种群进行RAPD分析 ,结果在 3个亚种UPGMA聚类图中 ,东亚飞蝗和西藏飞蝗的 2个种群以 10 0 %Bootstrap分别聚类在一起 ,亚洲飞蝗与东亚飞蝗的 2个种群以 6 6 %的Bootstrap聚类在一起。在 3个亚种所有个体的UPGMA聚类图中 ,亚种内的所有个体都聚类在一起 ,各自形成独立分支 ,说明 3个飞蝗亚种有明显的区别。西藏飞蝗的 2个种群之间 ,群居型与散居型东亚飞蝗之间在聚类图中混合聚类 ,说明它们之间存在基因交流

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