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《第四军医大学学报》 2004年13期
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水蛭素基因毕赤酵母表达载体的构建及高拷贝稳定整合菌株的筛选

龙铟  刘家云  刘莉  王宗仁  
【摘要】:目的 :构建水蛭素变异体HV1毕赤酵母分泌型表达载体 ,获得高拷贝稳定整合菌株 ,为大量获得重组水蛭素蛋白 ,进行功能研究及其临床应用奠定基础 .方法 :根据水蛭素HV1的氨基酸序列及毕赤酵母偏爱的密码子 ,设计HV1编码基因 ,分为 8条寡核苷酸片段进行DNA合成 ,经磷酸化、退火、连接和PCR扩增得到优化的HV1全长基因 ,测序结果正确的基因序列插入酵母表达载体pPIC9α分泌信号下游 ,再亚克隆入高拷贝载体pPIC9K ,得到pPIC9K HV1 ,SalI线性化后转化毕赤酵母GSM1 1 6 8,G4 1 8梯度筛选转化菌 ,PCR鉴定目的基因的整合 .结果 :获得了水蛭素毕赤酵母表达

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 龙铟;刘家云;刘莉;王宗仁;;水蛭素基因DNA家族改组方法的建立[J];中国实验方剂学杂志;2006年10期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 王佃亮;重组人溶菌酶研究进展[J];中国生物工程杂志;2003年09期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 彭远义;植酸酶产生菌的选育及高表达工程菌的构建研究[D];西南农业大学;2004年
2 戴芳;人骨保护素cDNA的克隆与表达[D];天津医科大学;2004年
3 李国才;人溶菌酶动物乳腺生物反应器的研制[D];扬州大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡乔;利用生物反应器表达重组人溶菌酶[D];上海交通大学;2008年
2 陈茜;新型牛溶菌酶基因的重组真核质粒构建及活性研究[D];四川大学;2007年
3 张学军;雪莲PEBP基因在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达[D];新疆农业大学;2007年
4 高碧峰;抗癫痫肽抗癫痫作用靶位筛选及功能探讨[D];第四军医大学;2007年
5 余小红;海栖热袍菌和重组毕赤酵母发酵产极耐高温木聚糖酶及酶的化学修饰[D];中国农业大学;2004年
6 赵红玲;利用毕赤酵母发酵表达植物甜蛋白(Brazzein)的初步研究[D];北京化工大学;2004年
7 李军;利用转基因毕赤酵母高表达重组人胰岛素[D];北京化工大学;2003年
8 朱秋菊;鸡输卵管暂态生物反应器表达人溶菌酶的研究[D];扬州大学;2005年
9 张伟;重组克痛宁在巴斯德毕赤酵母中的表达[D];北京化工大学;2005年
10 宋晓飞;N,O-二乙酰胞壁质酶R2基因的克隆及在枯草杆菌和毕赤酵母中的表达[D];山东大学;2005年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 周育,刘晖,谭涛超,黄仪秀,朱圣庚;DNA改组技术在水蛭素实验进化中的应用[J];中国生物化学与分子生物学报;2001年02期
2 赵小玲,荫俊,王慧,姜明,侯小军;人源抗狂犬病毒单链抗体库的构建及体外亲和筛选[J];细胞与分子免疫学杂志;2004年02期
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 苏瑾;逐瘀通脉滴丸的药学研究[D];佳木斯大学;2007年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张钧,张金艳,贾志英,林元珠,魏素菊;预防注射并发粉末毕赤酵母菌感染1例[J];河北医科大学学报;1998年02期
2 吴辉云,刘隆平,金运顺,吴玉霞;血液中分离出埃切毕赤酵母菌[J];中华检验医学杂志;1999年06期
3 蒋太交,吉鑫松,章如安,袁中一;在甲醇酵母Pichia pastoris胞内表达有活性的辣根过氧化物酶[J];中国生物化学与分子生物学报;2000年02期
4 马骊!510515,张智清,陈爱君,姚立红,姜忠良,王小宁!510515;人血管内皮生长因子在毕赤酵母菌中的表达和鉴定[J];中华实验和临床病毒学杂志;2000年04期
5 贾向志,袁汉英,马文煜,李元,李育阳;人溶菌酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达[J];第四军医大学学报;2001年22期
6 张春江,沈心亮,雷清,李启民;戊型肝炎病毒开读框架(ORF2)1.3kb片断巴斯德毕赤酵母表达载体的构建[J];兰州大学学报(自然科学版);2002年02期
7 黄志刚;从一例患者的血液中检出奥默毕赤酵母菌[J];中华检验医学杂志;2002年04期
8 易绍萱,吴军,贺伟峰,罗高兴,陈希炜,朱谨,代飞;人CTLA-4胞外区cDNA毕赤酵母表达载体的构建及高拷贝稳定整合菌株的筛选[J];重庆医学;2002年08期
9 张艳,杨清武,吕凤林;毕赤酵母高效电转化方法的探讨[J];中国修复重建外科杂志;2002年03期
10 剧海,梁东春,郭刚,张镜宇;用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA制备方法的比较[J];天津医药;2003年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 林琳;谢必峰;杨冠珍;施巧琴;林奇英;谢联辉;吴祥甫;吴松刚;;扩展青霉PF898碱性脂肪酶基因在大肠杆菌及毕赤酵母菌中的表达[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
2 李敏;周政;何宁佳;聂东宋;徐辉明;梁宋平;;虎纹捕鸟蛛毒素-1基因的克隆、测序及在毕赤酵母系统的分泌表达[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
3 王宏伟;金宁一;;抗HIV—1gp120单链抗体基因的克隆及其在毕赤酵母系统中的表达[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
4 易绍萱;吴军;贺伟峰;朱谨;罗高兴;陈希炜;代飞;张小容;;人CTLA4胞外区cDNA毕赤酵母表达载体的构建及高拷贝稳定整合菌株的筛选[A];全国烧伤早期处理专题研讨会论文集[C];2002年
5 林元珠;朱敬先;高顺强;万力;高建国;丁政云;张金艳;王文莉;;条件致病真菌感染与中药抗真菌作用研究的若干发现[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
6 周倩;王锡锋;李莉;周广和;高必达;;毕赤酵母Mut~+和Mut~s重组子表达美洲商陆抗病毒蛋白基因的比较[A];第三次全国植物病毒和病毒防治学术研讨会论文集[C];2003年
7 洪国强;胡波;吴宗华;李林;朱振宇;;乙型肝炎病毒S基因在毕赤酵母中的表达及在乙型肝炎病毒表面抗体检测中的应用[A];2004第二届世界华人临床生化和检验医学大会暨第六届全国检验医学学术会议论文汇编[C];2004年
8 杨湘越;兰小鹏;颜宏利;陈蕊雯;孙树汉;;猪囊尾蚴抗原cC1酵母表达产物性状的比较分析[A];2004第二届世界华人临床生化和检验医学大会暨第六届全国检验医学学术会议论文汇编[C];2004年
9 储炬;陈文;郭美锦;庄英萍;张嗣良;;重组毕赤酵母表达猪胰岛素前体恒化培养动力学及代谢流分析[A];代谢工程和工业生物技术研讨会论文集[C];2004年
10 王黎明;王琦;梅汝鸿;;超氧化物歧化酶在毕赤酵母中的表达[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 丛秀明;有机磷农药降解酶制剂制成[N];中国化工报;2006年
2 戴炳仁;我国发明果蔬迅速脱毒生物技术[N];中国国门时报;2006年
3 记者  范建;毕赤酵母能“吃掉”多种有机磷农药[N];科技日报;2006年
4 刘晴;有机磷农药降解酶制剂[N];农村医药报(汉);2006年
5 周铮;我国研制成功"有机磷农药降解酶制剂"[N];农民日报;2006年
6 郑成已;伯赛优化人ω干扰素基因工程菌发酵条件[N];中国医药报;2006年
7 记者 陈卫东;我破解基因工程产业化难题[N];科技日报;2007年
8 记者 朱永坤;有机磷农药降解酶研制步入工业化[N];农资导报;2007年
9 董丹 刘昱辉 吴元华;基因工程生产降钙素研究方兴未艾[N];中国医药报;2007年
10 ;基因科学的耕耘者[N];上海科技报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 韩雪清;猪瘟病毒E2基因遗传变异及体外表达研究[D];西北农林科技大学;2002年
2 彭明利;结核杆菌HSP70及其与HBsAg融合蛋白在Pichia pastoris 酵母中的表达和免疫学研究[D];重庆医科大学;2002年
3 刘堰;重组人白介素-2(IL—2)突变体克隆及在巴斯德毕赤酵母系统中的表达与纯化[D];重庆大学;2002年
4 杨清武;TLR4在LPS激活内皮细胞中的作用及其可溶性受体表达[D];第三军医大学;2002年
5 杜中军;苹果多酚HPLC测定方法及碱性磷酸酯酶在毕赤酵母中表达体系的建立[D];山东农业大学;2002年
6 刘继中;人骨保护素的表达及生物活性研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
7 于平;极大螺旋藻藻蓝蛋白基因的克隆及其表达研究[D];浙江大学;2003年
8 李敏;高甜度monellin基因和透明颤菌血红蛋白基因在毕赤酵母中的表达[D];中国农业科学院;2003年
9 杨健;重组人纤溶酶原K5在毕赤酵母中的表达、纯化及其抗肿瘤新生血管生成基因治疗[D];复旦大学;2003年
10 覃雅丽;猪伪狂犬病鉴别诊断方法的研究及单克隆抗体的制备[D];华中农业大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 苏彩霞;猪囊尾蚴磷蛋白在毕赤酵母系统中的表达[D];中国农业科学院;2002年
2 黄雯;人胸腺素α_1基因表达载体的构建及其在毕赤酵母中表达的研究[D];大连理工大学;2002年
3 张向荣;人Canstatin的cDNA克隆、表达及其活性的测定[D];重庆医科大学;2004年
4 魏骏飞;汉坦病毒S基因克隆及其在毕赤酵母系统中的表达[D];天津医科大学;2004年
5 王清路;腈水解酶基因的修正及与透明颤菌血红蛋白基因在毕赤酵母与烟草中的联合表达[D];西北农林科技大学;2004年
6 孙红立;毕赤酵母分泌表达牛白细胞介素2的机制研究[D];南京师范大学;2004年
7 陈杏洲;毕赤酵母植酸酶工程菌的改造及其初步发酵工艺研究[D];华中农业大学;2004年
8 李军;利用转基因毕赤酵母高表达重组人胰岛素[D];北京化工大学;2003年
9 刘彦丽;巴斯德毕赤酵母发酵生产重组人血清白蛋白的研究[D];北京化工大学;2003年
10 仲燕;贻贝抗菌肽Myticin A的克隆表达及生物学活性研究[D];第二军医大学;2004年
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