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《第四军医大学学报》 2003年06期
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PKB/Akt调节结构域的克隆,表达及初步纯化

王立峰  张健  李莹  苏金  药立波  刘新平  
【摘要】:目的 :克隆akt1的调节结构域 (regulationdomainRD)的编码基因 ,表达并纯化AktRD蛋白 ,为研究RD的功能奠定基础 .方法 :用RT PCR方法从胚胎肝细胞中获得Akt1调节结构域RD的编码基因 ,克隆至pMD18 T载体并测序 ,结果正确后亚克隆到含有 6个His的融合表达载体pRSET A中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,经IPTG诱导表达RD/6×His融合蛋白 ,超声裂菌 ,将上清通过金属螯合层析进行纯化 .结果 :从人胚胎肝细胞中扩增出编码RD的cDNA ,序列测定证实与文献报道的序列一致 ;成功构建了 6×His融合的表达载体pRSET A R

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