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《第三军医大学学报》 2011年05期
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抑制Pygo2表达对U251细胞增殖的影响

陈玉英  王海东  王占祥  谭国伟  刘希尧  沈上杭  
【摘要】:目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法针对Pygo2 cDNA序列设计并合成一对特异性的含有"短发卡"的寡核苷酸序列及其随机对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用RT-PCR和Western blot检测Pygo2 shRNA对U251细胞Pygo2 mRNA和蛋白的干扰效果,应用克隆形成实验和MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,BrdU掺入法检测DNA合成。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2 shRNA显著抑制了其mRNA和蛋白的表达,MTT分析其细胞增殖也被显著抑制(P0.01)。与scr shRNA组的克隆形成数(78.9±6.8)%相比,Pygo2 shRNA组克隆数(55.4±5.2)%显著减少(P0.05)。与对照组的BrdU掺入率(20.96±2.19)%相比,Pygo2 shRNA组的BrdU掺入率(8.81±0.56)%显著减少(P0.05),而scr shRNA组的BrdU掺入率是(20.35±1.73)%无显著变化。而且,Pygo2 shRNA使U251细胞处于S期百分比显著减少、G1期显著增加(P0.01),致细胞周期阻滞于G1期。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体,下调Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,使细胞阻滞于G1期,抑制细胞增殖。

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