收藏本站
《第三军医大学学报》 2010年19期
收藏 | 投稿 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

真核表达载体pEGFP-N1-hSyntenin的构建及其在人脑胶质瘤细胞CHG-5中的表达

钟东  唐文渊  冉建华  杨刚  晏怡  
【摘要】:目的构建pEGFP-N1-hSyntenin基因真核表达载体,并观察其在人脑胶质瘤细胞CHG-5中的表达。方法采用RT-PCR技术从人脑肿瘤组织中扩增hSyntenin,并将PCR产物双酶切后定向克隆入pEGFP-N1的多克隆位点,构建pEGFP-N1-hSyntenin重组质粒。经过菌落PCR、双酶切及测序验证后,采用脂质体转染技术将pEGFP-N1-hSyntenin融合基因转染CHG-5细胞表达,G418筛选建立稳定表达hSyntenin的CHG-hS细胞系。采用荧光检测和免疫印迹技术分析hSyntenin在稳定转染的CHG-5细胞系中的表达。结果菌落PCR鉴定出1个阳性克隆,阳性克隆经双酶切鉴定得到分别与载体和目的片段大小一致的4.7kb和897bp的两条片段,测序证实目的基因hSyntenin正确连接到pEGFP-N1的多克隆位点;pEGFP-N1-hSyntenin重组体稳定转染CHG-5细胞后,细胞荧光检测结果显示hSyntenin在CHG-5细胞质发出绿色荧光,免疫印迹检测可见32×103处的阳性条带。结论成功构建pEGFP-N1-hSyntenin重组质粒,并在人脑胶质瘤细胞CHG-5中获得稳定表达。

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈静;李振宇;朱芳;陈叶珊;罗鸣;;VEGF_(165)和VEGF_(165)b真核表达质粒的构建和鉴定[J];武汉大学学报(医学版);2011年05期
2 ;[J];;年期
3 ;[J];;年期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵欣;杨向军;李红霞;蒋延波;宋建平;刘志华;蒋文平;;稳定转染的hHCN2通道的电生理特点[A];中华医学会心血管病学分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2006年
2 戴钟铨;丁柏;李莹辉;张玉国;刘芃芃;;稳定转染COL1A1-EGFP基因的ROS17/2.8细胞株的建立[A];中国空间科学学会空间生命专业委员会2003年中国空间生命科学与航天医学会议论文摘要集[C];2003年
3 沈原;赵永波;;人SNCA基因过表达慢病毒载体构建及稳定转染293T细胞系的建立[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
4 鲍慧慧;程晓曙;陈崎;李萍;;人热休克蛋白22基因稳定转染内皮细胞系的建立与鉴定[A];中华医学会心血管病学分会第十次全国心血管病学术会议汇编[C];2008年
5 周亚锋;杨向军;李红霞;蒋文平;;稳定转染hHCN4起搏通道亚型的电生理特点[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年
6 位全芳;杨劲;曾益军;周虎传;;重组人PCNA突变体的克隆与稳定表达[A];第九届西南三省一市生物化学与分子生物学学术交流会论文集[C];2008年
7 何琼琼;程瑞雪;冯德云;李波;郑晖;;丙型肝炎病毒 NS3基因对人肝细胞生物学特性的影响[A];中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会论文汇编[C];2007年
8 朱琍燕;仇灏;周迎会;吴士良;;一种新型糖基转移酶:β3GalT7基因的RNA干扰表达载体构建及其细胞学表型功能的初步研究[A];2008年全国糖生物学学术会议论文摘要[C];2008年
9 陈焰;贾柳萍;田德英;黄腊平;;HEV ORF3真核表达载体的构建、表达及生物学功能初探[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
10 尹德云;佟慧丽;高学军;张莉;李庆章;曲一函;;家蚕抗菌肽CecropinB基因在奶山羊乳腺上皮细胞中的表达[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 高宁;MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
2 徐剑文;蛇毒金属蛋白酶抑制剂BJ46a抗黑色素瘤细胞侵袭转移作用[D];福建医科大学;2007年
3 马雷;RNA干扰抑制人乳腺癌MCF-7细胞S100A4基因表达的实验研究[D];南方医科大学;2010年
4 陈敬洲;新基因IC53的功能研究[D];中国协和医科大学;2003年
5 申乐;人载脂蛋白(a)羧基末端kringles对血管生长和肿瘤生长的影响[D];中国协和医科大学;2006年
6 龚凤英;细胞因子对垂体人生长激素基因表达的调节及其机理的研究[D];中国协和医科大学;2003年
7 杨季云;Pkhd1基因条件性剔除打靶载体的构建及其功能研究[D];四川大学;2007年
8 原泉;负载IGF-1及BMP-2的新型组织工程软骨的实验研究[D];中国医科大学;2007年
9 郭向云;从细胞生长和乙醇诱导细胞凋亡的角度初步探讨hEra的功能[D];第四军医大学;2010年
10 张力;猪Nanog基因在成纤维细胞与克隆胚胎中的过表达研究[D];东北农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 焦平;人分泌型KL蛋白在CHO细胞中的稳定表达[D];吉林大学;2005年
2 于秋萍;基质金属蛋白酶MMP-26在原核和真核细胞中的表达研究[D];吉林大学;2009年
3 顾燕;蚊抗药性相关新基因NYD-Ch和NYD-Tr的初步功能研究[D];南京医科大学;2005年
4 任婷婷;DDR2重组腺病毒系统的建立及其与MMP-13活化相关性的初步研究[D];第四军医大学;2007年
5 许莉妍;角质细胞生长因子(KGF)的表达及其生物学活性研究和成纤维细胞生长因子受体(FGFR)抑制剂稳定转染筛选模型的建立[D];厦门大学;2009年
6 位全芳;人PCNA泛素化修饰在顺铂诱导的DNA损伤应答反应中作用的实验研究[D];第三军医大学;2008年
7 郭明日;人类SIRT1多克隆抗体制备及SIRT1基因在肝癌细胞株HepG2中作用的初步研究[D];中南大学;2009年
8 李立华;利用人转录因子siRNA文库筛选凋亡相关siRNA[D];中国协和医科大学;2008年
9 汤展毅;牛Myf6基因克隆及在成肌细胞中的表达[D];东北农业大学;2010年
10 陈振华;HCV亚基因复制子QSG7701细胞株的建立及CTE-核酶对HCVRNA复制的影响[D];中南大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026