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《第二军医大学学报》 2011年02期
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下调Pygo2抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及其cyclin D1的表达

陈玉英  王海东  王占祥  刘希尧  谭国伟  沈上杭  
【摘要】:目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pygo2cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法检测Pygo2shRNA对U251细胞Pygo2mRNA和蛋白表达的干扰效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,BrdU掺入法检测DNA合成,Transwell检测细胞侵袭。采用蛋白质印迹和免疫荧光法检测Pygo2shRNA对U251细胞cyclin D1、β-catenin蛋白水平和亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2shRNA显著抑制了U251细胞Pygo2mRNA和蛋白的表达;Pygo2shRNA抑制U251细胞Pygo2表达后,细胞增殖显著降低,细胞更多地阻滞在G1期,且BrdU掺入显著减少,侵袭细胞数显著减少。此外,抑制Pygo2表达可显著下调U251细胞cyclin D1的表达但不改变其亚细胞定位。U251细胞β-catenin表达及其亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体。抑制Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,可能通过下调Wnt信号靶基因cyclin D1的表达,使细胞阻滞于G1期而抑制细胞增殖和侵袭。

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 张勇;王斌;周幽心;;人脑胶质瘤中APC、β-catenin及CyclinD1表达[J];中国肿瘤;2012年05期
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 王博谦;彭诗东;;KAI1和COX-2与喉癌的研究进展[J];内蒙古医学院学报;2010年S4期
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前3条
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2 张志强;陈红庆;陈映红;程新富;;脑胶质瘤中β-catenin和细胞周期素D1表达的意义[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年11期
3 赵尚峰;刘向荣;储波;张懋植;王磊;;β-catenin在胶质瘤中的表达及其意义[J];中国卫生检验杂志;2010年01期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
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【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈玉英;王海东;王占祥;谭国伟;刘希尧;沈上杭;;抑制Pygo2表达对U251细胞增殖的影响[J];第三军医大学学报;2011年05期
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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中国重要报纸全文数据库 前10条
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7 记者 匡远深;胶质瘤最易侵袭部位为岛叶[N];健康报;2009年
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9 匡远深;大脑岛叶是旁边缘系统胶质瘤最易侵袭部位[N];中国医药报;2009年
10 本报记者 刘亚东;有了生物芯片 大海捞针不难[N];科技日报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
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3 朱莉;高b值磁共振弥散加权成像在胶质瘤中的应用研究[D];复旦大学;2011年
4 张家墅;术中磁共振与多模态导航在语言区胶质瘤手术及脑穿刺活检中的应用[D];中国人民解放军军医进修学院;2012年
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7 孙继勇;胶质瘤恶性进展相关新基因研究[D];苏州大学;2003年
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10 路华;胶质瘤相关基因甲基化与突变的实验研究[D];昆明医学院;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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2 梁峰;PTEN与Ki67在胶质瘤中的表达及临床意义[D];中国医科大学;2007年
3 单伟;胶质瘤中E2F-1、Rb的表达及其与肿瘤恶性程度的相关性研究[D];中国医科大学;2008年
4 王彦平;β-catenin与CyclinD1、MIB-1在人脑胶质瘤中的表达及临床意义[D];苏州大学;2009年
5 邵耐远;胶质瘤恶性进展相关基因表达谱的建立和初步研究[D];苏州大学;2002年
6 王爱东;胶质瘤恶性进展相关基因表达谱中凋亡相关基因的初步研究[D];苏州大学;2003年
7 许进;人脑胶质瘤中uPA的表达及临床意义[D];吉林大学;2005年
8 李志清;脑胶质瘤的多体素磁共振波谱研究[D];中国医科大学;2002年
9 王莉;SV40、JCV和BKV与人胶质瘤病因的相关性研究[D];郑州大学;2003年
10 连葆强;高表达HSP70鼠脑胶质瘤瘤苗的体内抗瘤作用研究[D];福建医科大学;2003年
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