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《第二军医大学学报》 2002年02期
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重组人肿瘤坏死因子a衍生物3a的克隆与表达

娄永华  焦炳华  周丙荣  王梁华  余伟民  朱玉平  
【摘要】:目的 :寻找具有更强抗肿瘤活性和 (或 )较低毒副作用的 TNFα突变蛋白。 方法 :应用巨引物二轮 PCR技术对rh- TNFα的第 80、90和 92位氨基酸编码的密码子进行定点突变 ,经过 DNA序列测定证实 DNA突变准确后 ,将突变基因的c DNA插入 p BL载体 ,转化大肠杆菌 DH5α,获得表达 rh- TNFα- D3a的工程菌。 结果 :经巨引物二轮 PCR获得表达 TNFα突变蛋白的基因突变 ,经序列测定结果与设计一致 ,重组蛋白表达量占细菌总蛋白 18.0 % ,大部分为可溶性 ,占 rh- TNFα- D3a总量的 6 0 %以上。重组蛋白经纯化 ,纯度 98%。 rh- TNFα- D3a对 L 92 9细胞表现出较高的细胞毒性 ,比活性大于 5× 10 8IU / mg。与野生型的 rh- TNFα相比 ,rh- TNFα- D3a的毒性降低为野生型的 1/ 10 ,同时其保留了 TNFα的抗肿瘤活性。 结论 :rh- TNF-αD3a是一个毒性较低 ,具有较强抗肿瘤作用的衍生物

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 于蓝;菌毒清主要成份测定及其毒性和免疫调节作用的研究[D];甘肃农业大学;2010年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 王梁华,焦炳华;重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a的制备及纯化[J];第二军医大学学报;1996年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
2 王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
3 康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
4 安刚;黄天华;谢庆东;王德刚;;pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
5 朱斌;杨罗艳;赵晓昆;;膀胱癌多药耐药基因MDR-1与金属硫蛋白-3表达的关系[J];癌变.畸变.突变;2007年05期
6 毕玉平,廖俊杰,单雷,王兴军,徐平丽;番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究[J];山东农业科学;1997年06期
7 单雷,毕玉平,王兴军,徐平丽,李广存;双抗TMV和CMV转基因番茄后代的遗传分析[J];山东农业科学;1998年04期
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10 刘可杰,吕淑霞,沈世华;FaDREB1基因RNAi的植物表达载体的构建[J];安徽农业科学;2005年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王春花;成军;郎振为;吴煜;杨艳杰;张黎颖;刘妍;;基因表达谱芯片技术筛选XTP3蛋白反式调节基因[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
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3 樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
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5 陈振文;赵太云;孙贺娟;路静;王迎;孟霞;曹争和;王钜;;微卫星DNA与生化标记分析对长爪沙鼠群体遗传分析的比较[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
6 王革;王妍;何凌冰;乔刚;朱一松;王君艳;;酵母分泌表达重组人神经生长因子[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
7 任华;顾建华;孙竹筠;沈万赟;吴鹰;周忠良;;RT-PCR法检测斑马鱼(Danio rerio)卵黄蛋白原mRNA表达[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
8 马珺;陈云霜;王爱善;李仲逵;;珍稀鸟类东方鹳的性别鉴定[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
9 马勋;陆承平;;猪戊型肝炎病毒新疆分离株全基因序列的分析[A];中国科协2005年学术年会“新疆现代农业论坛”论文专集[C];2005年
10 吴晓娟;冷梅;赵大鹏;崔颖杰;张岩;汪春义;戚凤春;郭新;付学奇;;带有IL-2基因佐剂的乙肝病毒DNA疫苗构建及其免疫效果的观察[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 魏朝明;中国螽(虫斯)总科昆虫的RAPD分析研究[D];陕西师范大学;2000年
2 贾永清;表达禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2000年
3 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
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5 陈烨;幽门螺杆菌粘附素HpaA的克隆、表达及其免疫原性和保护性研究[D];第一军医大学;2000年
6 刘明;H5和H7亚型禽流感分子防制技术的研究[D];中国农业科学院;2000年
7 姚乌兰;多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的制备及其基因克隆和表达[D];中国农业科学院;2000年
8 叶纨芝;白菜细胞核雄性不育相关基因mf-CYP450的分子鉴定、克隆和序列分析[D];浙江大学;2001年
9 吴健;肝移植病人乙型肝炎病毒再感染的临床和基础研究[D];浙江大学;2001年
10 宋福平;苏云金芽孢杆菌特殊异性cry基因的研究[D];东北农业大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘波;稻蝗及其近缘属部分种RAPD多态性及中华稻蝗种群遗传多态性研究[D];陕西师范大学;2000年
2 郭巍;苏云金芽孢杆菌cry2Aa基因克隆及表达的研究[D];东北农业大学;2000年
3 刘怀然;鸡传统性法氏囊病抗独特型抗体疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
4 赫英俊;DNA分子标记技术在海带种质鉴定中的应用[D];中国科学院海洋研究所;2000年
5 桑红;新生隐球菌产黑素野生株与白化突变株酚氧化酶结构基因(CNLAC1)的比较研究[D];第二军医大学;2000年
6 杜德伟;乙型肝炎病毒DNA免疫的实验研究[D];第四军医大学;2000年
7 吴振龙;副溶血性弧菌直接溶血毒素基因的克隆、突变研究[D];第一军医大学;2000年
8 熊绍虎;人骨形态发生蛋白-2在大肠杆菌中的高效表达[D];第一军医大学;2000年
9 刘成龙;大鼠脊髓损伤后一氧化氮合酶活性及其基因表达动态变化的研究[D];第一军医大学;2000年
10 胡舜英;腺相关病毒载体介导外源基因入人外周血干/祖细胞的实验研究[D];第一军医大学;2000年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘芳;宋云鹏;;“复方板蓝根制剂”治疗鸡传染性支气管炎的效果[J];安徽农业科学;2009年33期
2 金治萃,高光,常江,贾彦彬,李雪莲;枸杞煎剂对小鼠免疫功能的影响[J];包头医学院学报;1997年03期
3 刘玉涛,周禾,白小薇,殷金珠;枸杞多糖对小鼠胸腺细胞凋亡的调节[J];北京医科大学学报;1996年02期
4 高桂生;李春玲;史秋梅;王贵平;向华;沈萍;汤生玲;;中药“疫佳灵”对雏鸡免疫器官及血液中T淋巴细胞数量的影响[J];东北农业大学学报;2005年06期
5 曹颖瑛,郑钦岳,张国庆,曹尉尉;淫羊藿甙促进小鼠脾细胞IL-3 mRNA及IL-6 mRNA的表达[J];第二军医大学学报;1998年02期
6 朴香淑,李德发;中草药饲料添加剂促进畜禽生长性能研究现状及展望[J];饲料工业;2002年01期
7 倪峰;免疫活性的中药多糖[J];福建中医学院学报;2001年01期
8 李瑞斌;;兽医中药的免疫基础[J];广东奶业;2006年01期
9 马骏,任远,崔祝梅,姜晓霞;红芪多糖对氢化可的松所致免疫抑制模型小鼠T淋巴细胞亚群的影响[J];甘肃中医学院学报;2003年03期
10 马得莹,单安山;中草药对动物生长、内分泌和免疫功能的影响[J];中国畜牧兽医;2004年01期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 焦炳华,周丙荣,朱玉平,周凯,王梁华,娄永华;重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a体外对肿瘤细胞的直接细胞毒作用[J];药物生物技术;1996年01期
【相似文献】
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1 任先达,杨政红,张海伟,叶春玲,蔡绍晖,叶开和;SC58125抑制IκBα降解调节TNF-α诱导的HT29细胞凋亡[J];中国药理学通报;2005年07期
2 周丽,王立赞,朱凡河;山莨菪碱对TNFα诱导的内皮细胞[Ca~(2+)]i增高的拮抗作用[J];济宁医学院学报;2004年04期
3 丁守怡,宋立萍,杨英;肿瘤坏死因子在宫颈细胞系表达及其杀伤作用[J];青岛大学医学院学报;2003年01期
4 刘絮,沈维高,刘艳波;COPD大鼠肺组织TNFα及mRNA表达的实验研究[J];北华大学学报(自然科学版);2004年05期
5 张静,刘彦仿,杨守京,乔庆,程虹,张素珍,马福成;鼠源化抗肝癌免疫毒素的导向研究[J];肝胆外科杂志;2003年03期
6 唐勇,方洵,张淑玉,陈珍旭,周青春;TGFβ_1和TNFα水平与肺间质纤维关系及其临床意义[J];临床肺科杂志;2005年02期
7 黎金庆,唐超生,莫东华,周润华,刘陶文;急性白血病患者血清sFas、TNFα水平及其与治疗效果的关系[J];白血病.淋巴瘤;2001年02期
8 袁健,孙宁;细胞周期与鼻咽癌的放射增敏[J];海南医学院学报;2004年03期
9 刘晓渭,李冬梅,李元勋,赵正辉,徐月清;糖皮质激素对原发性肾病综合征患者TNFα的影响[J];第四军医大学学报;2001年08期
10 高金明,林耀广,邱长春,刘怡雯,马毅,刘英,朱元珏;肿瘤坏死因子α/淋巴毒素α基因多态性与支气管哮喘的关系[J];基础医学与临床;2003年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 谭凤明;侯显曾;卢浩锵;熊春萍;张窖岳;;斑秃与血清TNFα的相关性初探[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
2 管宇宙;崔丽英;李延峰;张俊宝;;重症肌无力患者肿瘤坏死因子启动子TNFα等位基因多态性及体内外分泌活性的异常[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
3 李烁;金雨荪;祝世功;;脑缺血性神经元损伤机制中TNFα的作用[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年
4 张杰;高波;赵安;刘农乐;王会信;薛沿宁;;TNFα结合肽的筛选及其生物学功能研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
5 蔡忠华;宋林生;JunZou;SecombesCJ;PeddieS.;;虹鳟肿瘤坏死因子(TNFα)基因在大肠杆菌中的表达[A];甲壳动物学分会成立20周年暨刘瑞玉院士从事海洋科教工作55周年学术研讨会论文(摘要)集[C];2002年
6 汤琳;郑璐;庄羽美;戚春建;马泓冰;周璇;张学光;;鼠抗人CD40突变体单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
7 施有为;杨静;殷丽琼;刘江潮;;慢性心力衰竭患者TNFα水平变化的临床意义[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年
8 王占科;许霖水;杨莉萍;褚芳;熊晓平;郭宝珠;;肿瘤坏死因子α对组织细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活力影响[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年
9 张飙;郝振林;黄玉林;张秋敏;杨奕;田阳;;烧伤病人血浆肿瘤坏死因子-α及其可溶性受体的变化[A];中华医学会第五次全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];1997年
10 柴家科;申传安;;肿瘤坏死因子对骨骼肌细胞内泛素系统基因表达的调节及意义[A];全国烧伤创面处理、感染专题研讨会论文汇编[C];2004年
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1 潘爱群;撰写生物技术专利 申请文件有技巧[N];中国医药报;2003年
2 兴业证券 王光清;肿瘤坏死因子上市能否起波澜[N];医药经济报;2003年
3 新华;新型肿瘤坏死因子NC进入Ⅱ期临床试验[N];医药经济报;2000年
4 王茜;先天性白内障致病基因关键点突变被发现[N];医药经济报;2004年
5 东辰;二医大研制出抗癌类新药“重组人新型肿瘤坏死因子”[N];中国高新技术产业导报;2001年
6 王雪飞;国人耳聋基因热点突变被发现[N];健康报;2007年
7 ;21-羟化酶缺乏症患者CYP21基因点突变研究[N];中国医药报;2003年
8 ;加强肥胖防治研究倡导科学健康减肥[N];中国医药报;2003年
9 周清华 侯梅;新型重组人肿瘤坏死因子有化疗增敏作用[N];中国中医药报;2003年
10 记者 黄才刚;慢性气道炎与细胞因子失衡有关[N];健康报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 黄建安;CD40信号在人肺癌中的作用及其在免疫治疗中的运用研究[D];苏州大学;2002年
2 金玉怀;CCK-8对大鼠成纤维细胞样滑膜细胞增殖及MMPs产生的影响及其可能作用机制的研究[D];河北医科大学;2003年
3 潘韫丹;核因子-κB对神经病理性疼痛及其脊髓免疫炎症因子表达的调节[D];中南大学;2009年
4 童安莉;细胞因子TGFα、TNFα和VEGF在嗜铬细胞瘤发病机制中的作用[D];中国协和医科大学;2002年
5 宋红丽;肿瘤坏死因子α在暴发性肝衰竭时引起肠粘膜损伤机制的研究[D];中国医科大学;2005年
6 李罗丝;人参皂苷Rh2诱导HL-60细胞凋亡的信号转导机理[D];中南大学;2006年
7 李琳;肿瘤多药耐药性逆转的相关研究[D];复旦大学;2006年
8 王大博;TNFα对鼠眼房水外流影响的形态学观察[D];青岛大学;2002年
9 黄健;内毒素血症时交感-迷走神经张力平衡的改变及其对全身炎症反应的影响[D];第三军医大学;2005年
10 王洪超;肝脏缺血再灌注损伤机制的探讨及丹参单体保护作用的实验研究[D];中国协和医科大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 周伟;化疗药物对TRAIL诱导人肺腺癌细胞凋亡的影响及其机制[D];山东大学;2005年
2 洪阳春;血府逐瘀汤对气血两伤型肺挫伤的临床研究[D];广州中医药大学;2007年
3 陈红;类胰蛋白酶等介质在豚鼠药物过敏性休克组织表达及意义[D];吉林大学;2008年
4 许飞;内皮素、肿瘤坏死因子在危重病中的临床实验研究[D];江西医学院;2000年
5 罗立欣;过敏性紫癜IL-10、TNF-α的变化与中医证的相关性研究[D];辽宁中医学院;2005年
6 甄学慧;瘦素、肿瘤坏死因子与妊娠期高血压疾病的相关性研究[D];吉林大学;2007年
7 余志华;氧化苦参碱对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[D];华中科技大学;2006年
8 彭文锋;肿瘤坏死因子-α-308位点基因多态性与依那西普治疗强直性脊柱炎的相关性研究[D];中南大学;2008年
9 苗云峰;解毒通腑汤治疗急性单纯性阑尾炎的临床研究[D];山东中医药大学;2008年
10 张婷;乳黄制剂对肝硬化大鼠肠源性内毒素血症的研究[D];湖北中医学院;2009年
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