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《东北农业大学学报》 2017年07期
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肇东盐单胞菌中胞苷酸激酶基因cmk的克隆与功能分析

姜巨全  杨立娜  刘艳双  孙开福  
【摘要】:为探究一株中度嗜盐菌-肇东盐单胞菌(Halomonas zhaodongensis)NEAU-ST10-25T的耐盐碱机制,采用基因文库筛选方法从该菌株获得一个重组质粒p UC-LYS1。该质粒可恢复大肠杆菌(Escherichia coli)Na+/H+逆向转运蛋白缺陷株KNabc在含有0.2 mol·L-1Na Cl的LBK培养基上生长。序列分析显示,重组质粒p UC-LYS1中外源DNA片段由1个N端截短的ORF1、三个完整的ORF(ORF2-4)以及1个C端截短的ORF5组成。其中,ORF4与伸长盐单胞菌(Halomonas enlongata)中1个推测的胞苷酸激酶(Cytidylate kinase,CMK)同源性最高(86%)。为便于区分与其同源物,编码ORF4的基因cmk来自肇东盐单胞菌(Halomonas zhaodongensis)被定名为Hz_cmk。Hz_CMK也与包括已被鉴定来自大肠杆菌(E.coli)的Ec_CMK等其他同源物具有较高同源性。为进一步鉴定Hz_cmk是否编码胞苷酸激酶,通过PCR扩增分别将Hz_cmk和大肠杆菌(E.coli)的同源基因Ec_cmk(作为正对照)构建至原核表达载体p ET19,转化到大肠杆菌(E.coli)C41(DE3)感受态细胞中诱导表达。SDS-PAGE表明其以可溶形式存在。酶学分析表明Hz_CMK与Ec_CMK均具有较高胞苷酸激酶活性。为国内外首次中度嗜盐菌的胞苷酸激酶基因功能鉴定。
【作者单位】东北农业大学生命科学学院;
【基金】:国家自然科学基金面上项目(31570045) 黑龙江省自然科学基金面上项目(C201417) 黑龙江省博士后科研启动金(LBH-Q14022)
【分类号】:Q78;Q936
【正文快照】:
Abstract:In order to explore the halo-alkaline-tolerant mechanism of the moderate halophileHalomonas zhaodongensis NEAU-ST10-25T,genomic DNA was screened from this strain by selection inEscherichia coli KNabc lacking three major Na+/H+antiporters.One rec

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