反向PCR分离侧翼序列技术研究进展

王静

【摘要】：反向PCR(inverse PCR,IPCR)是第一个依赖于PCR反应扩增旁侧序列的实验技术。IPCR可以在一个反应过程中,同时扩增已知序列两端的旁侧序列,省时简便,结合LR-PCR,RACE,SMART等技术,应用范围日益广泛;但IPCR也存在一些缺点,酶切、自连过程受到很多不确定因素的影响。现总结20 a来利用该技术克隆旁侧序列的研究成果,并提出优化的反应体系,以期对此项技术有更加系统的认识。

【作者单位】：内蒙古大学生命科学学院生物工程中心内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术重点实验室;
【关键词】： IPCR 克隆 旁侧序列
【分类号】：Q503
【正文快照】：

分子生物学研究过程中，阐明病毒、转座子的整合机理，寻找已知基因的启动子，分离基因调控区，分析转基因生物基因组中外源基因的插入位点，以及发现插入突变导致的新基因等研究都有赖于旁侧序列克隆技术的发展‘”。因此.对侧翼序列克隆方法进行研究具有重要的理论与现实意

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	【引证文献】
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前2条

1	赵鹤翔;核内小分子对PCR增效作用的研究[D];哈尔滨工业大学;2011年
2	吕二盼;动物源性食品中各种动物源性肉及肉制品鉴别检验的研究[D];河北农业大学;2012年

	【参考文献】
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前7条

1	洪登峰;万丽丽;杨光圣;;侧翼序列克隆方法评价[J];分子植物育种;2006年02期
2	洪宇植;肖亚中;房伟;童品贵;袁璟;孙芹英;;长距离反向PCR技术高效扩增已知DNA片断的侧翼序列[J];激光生物学报;2006年01期
3	韩志勇,王新其,沈革志;反向PCR克隆转基因水稻的外源基因旁侧序列[J];上海农业学报;2001年02期
4	李竹红,刘德培,梁植权;改进的反向PCR技术克隆转移基因的旁侧序列[J];生物化学与生物物理进展;1999年06期
5	王德培;孙伟;李明春;魏东盛;张颖慧;邢来君;;利用长引物嵌套式反向PCR方法克隆雅致枝霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列[J];生物工程学报;2006年04期
6	陆合;朱钰;黄尤田;;反向PCR克隆黑根霉R306Δ6-脂肪酸脱饱和酶基因[J];微生物学杂志;2008年01期
7	王莹,李旭,陈葳;以反向PCR扩增抗人宫颈癌单克隆抗体重链可变区基因[J];细胞与分子免疫学杂志;2002年05期

	【共引文献】
	【共引文献】

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前10条

1	陈兰英,赵桢,王晓涛,屈二军,陈建南;HSP70基因在人胃癌、食道癌及宫颈癌中高表达和癌变关系的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年04期
2	程烽;盛燕;施静艺;陈漪;徐潮;刘智;梁军;潘春明;朱忠勇;宋怀东;;重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体[J];癌变.畸变.突变;2007年01期
3	温居一;张积仁;李鹏;张军;王斌;;NADH对二乙基亚硝胺所致L02人肝细胞株p53基因突变和c-erbB2基因表达的影响[J];癌变.畸变.突变;2009年05期
4	金艺凤;李铁臣;王莹;刘东华;孙珍贵;;ERCC1和XPD单核苷酸多态性与非小细胞肺癌铂类化疗敏感性的关系[J];癌变·畸变·突变;2010年05期
5	王继英;武英;郭建凤;呼红梅;张印;;莱芜黑猪保种群促卵泡素β亚基和雌激素受体基因、基因型变化情况[J];山东农业科学;2007年01期
6	陈静;胡晓辉;苗华荣;张建成;禹山林;;花生SRAP-PCR技术体系的优化[J];山东农业科学;2008年05期
7	陈长宝;朱树华;周杰;;改良CTAB法提取成熟肥城桃果实的总RNA[J];山东农业科学;2009年05期
8	葛宏华,肖亚中,姚建平;人心室肌球蛋白轻链1基因的克隆及其体外的表达与纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2004年06期
9	侯新东;盛桂莲;张桦;腊萍;;质粒DNA提取方法的探讨[J];安徽农学通报;2006年13期
10	朱美霞,孟艳玲,陈良兵;大豆与棉花抗性基因类似物的同源性比较及其进化分析[J];安徽农业科学;2005年02期

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前10条

1	闫云君;蔡勇;杨江科;;基于易错POR技术的短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)脂肪酶YZO2的定向进化[A];节能环保和谐发展——2007中国科协年会论文集（一）[C];2007年
2	郭奕斌;陈路明;孟亚仙;王晶晶;杜传书;潘敬新;;一个广东四川家庭的IDS基因新突变[A];第六届全国优生科学大会论文汇编[C];2006年
3	于占东;赵双宜;何启伟;王翠花;牟晋华;刘春香;;抗芜菁花叶病毒转基因大白菜的研究[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年
4	龚束芳;杨涛;车代弟;;偃麦草根茎非质体蛋白质修饰冰晶能力的观察[A];2007年中国园艺学会观赏园艺专业委员会年会论文集[C];2007年
5	王英;滕齐辉;曹慧;胡锋;崔中利;;淹水和旱作水稻土中细菌群落多样性的空间分布[A];第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会论文集[C];2007年
6	崔保安;魏战勇;;猪细小病毒vaccine株VP2基因克隆与抗原性分析[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
7	胡功政;孙亚伟;陈红英;司红彬;苑丽;邓立新;莫娟;李胜利;;鸡志贺氏菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的基因分型[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
8	赵其波;高燕;蒋从军;;海岛棉抗病突变体HPFW356与原始材料新海16号的AFLP分析[A];中国棉花学会2009年年会论文汇编[C];2009年
9	崔晓燕;方定志;刘秉文;;人肝脏高凝状态相关基因的筛选[A];2004全国血脂分析及其临床应用学术研讨会、第七届全国脂蛋白学术会议论文汇编[C];2004年
10	王志宇;王健伟;何深一;吴围屏;韩金祥;洪涛;;截短型A组轮状病毒VP6在E.coli中的高效表达[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年

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前10条

1	徐荣燕;嗜热真菌糖苷酶的基因克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
2	殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年
3	杨瑞梅;单链抗体介导狂犬病毒shRNA靶向制剂的研究[D];甘肃农业大学;2010年
4	宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
5	郭新军;拟黑多刺蚁肌细胞增强因子2与肌钙蛋白Ⅰ亚基基因的克隆及其在发育中的表达研究[D];陕西师范大学;2010年
6	生书晶;何首乌芪合酶基因（FmSTS）的克隆、鉴定及转化拟南芥研究[D];华南理工大学;2010年
7	梁东;苹果山梨醇代谢相关基因的分子特性研究[D];西北农林科技大学;2010年
8	朱彦涛;甘蓝型油菜Polima CMS和陕2A CMS的形态和生化特征及其胞质遗传物质的比较研究[D];西北农林科技大学;2010年
9	郑学东;剩余数与PCR在DNA计算中的应用[D];华中科技大学;2009年
10	王子成;DNA计算中的核酸序列设计及应用研究[D];华中科技大学;2009年

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前10条

1	高红梅;ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO-1的影响[D];华中农业大学;2010年
2	汪艳杰;水稻polycomb基因家族甲基化状态初步检测[D];华中农业大学;2010年
3	王伟;恶臭假单胞菌表面展示细菌漆酶及对染料的脱色性能[D];华中农业大学;2010年
4	黄辉;哈维弧菌表面抗原的克隆和真核表达[D];华中农业大学;2010年
5	段龙川;产毒素多杀性巴氏杆菌重组沙门氏菌基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2010年
6	龚瑞;粘附素ClfA和Cna对金黄色葡萄球菌乳腺炎的免疫保护研究[D];华中农业大学;2010年
7	王萍萍;盾壳霉产孢相关基因的克隆及腺苷脱氨酶(CMADA)基因的初步研究[D];华中农业大学;2010年
8	辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
9	陆玉成;AMF基因在食管鳞癌细胞株中的表达及功能初步分析[D];郑州大学;2010年
10	曾磊;杜氏盐藻叶绿体双筛选载体pchlN-CAT-BAR的构建及转化[D];郑州大学;2010年

	【同被引文献】
	【同被引文献】

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前10条

1	杨坤;吴学龙;朗春秀;陈锦清;;优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究[J];安徽农业科学;2010年10期
2	袁继红;;实时荧光定量PCR技术的实验研究[J];现代农业科技;2010年13期
3	亏开兴,李文贵,朱芳贤,文际坤;应用线粒体DNA鉴定动物源性饲料成分研究进展[J];黄牛杂志;2002年06期
4	王丽媛;叶建荣;李兴民;刘毅;戴瑞彤;;PCR技术检测食品与饲料中动物源成分[J];保鲜与加工;2006年04期
5	宗卉;范万红;温燕辉;;应用多重PCR同时检测牛、羊源性成分[J];中国草食动物;2006年06期
6	徐君怡;曹际娟;王长文;王秋艳;;虎制品的SYB RGreen Ⅰ实时荧光PCR特异性鉴定[J];东北林业大学学报;2010年10期
7	庄金秋,李建亮,贾杏林;原位PCR及其在兽医分子生物技术中的应用[J];动物医学进展;2004年03期
8	陈超;高洪;赵宝洪;屈长林;;原位PCR技术及其在病理学中的应用[J];动物医学进展;2007年05期
9	李娜;乔光明;禚林海;唐波;;纳米材料在聚合酶链式反应体系中的应用研究进展[J];分析化学;2010年01期
10	刘正斌,高庆荣,王瑞霞,乔晓琳,邱新民;多重PCR技术在植物生物学研究中的应用[J];分子植物育种;2005年02期

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前3条

1	查代明;杨福合;张兆刚;邢秀梅;;利用mtDNA序列鉴定动物物种研究进展[A];2010中国鹿业进展[C];2010年
2	曹文静;王斌;徐慧珍;唐锦治;;应用多重PCR及PCR／反向点杂交法诊断地中海贫血[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年
3	王强;盛海清;肖艳萍;曾溢滔;;反向PCR精确鉴定人凝血因子IX基因在小鼠染色体中的整合位置[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年

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前3条

1	张娟;PCR-mtDNA技术鉴别检测肉食品和饲料中鸭源性成分的研究[D];甘肃农业大学;2007年
2	申志勇;PCR引物特异性评估体系及多重PCR引物设计系统的构建与应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年
3	张明阳;应用PCR-SSCP和PCR-RFLP方法分析线粒体DNA多态性及其法医学应用的研究[D];中国医科大学;2009年

	【二级参考文献】
	【二级参考文献】

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前5条

1	沈革志,张建军,殷丽青,王新其,陈全庆,范昆华;根癌农杆菌介导Ds转座因子的水稻遗传转化[J];上海农业学报;1998年04期
2	李竹红,刘德培,梁植权;改进的反向PCR技术克隆转移基因的旁侧序列[J];生物化学与生物物理进展;1999年06期
3	王槐,陈正华;基质结合区(MARs)与转基因植物的基因表达[J];生命科学;1999年02期
4	张景六;;转座因子标签法[J];植物生理学通讯;1993年06期
5	华志华,黄大年;转基因植物中外源基因的遗传学行为[J];植物学报;1999年01期

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前10条

1	王莹;韩烈保;曾会明;;高等植物启动子克隆方法的研究进展[J];生物技术通报;2007年03期
2	倪云;;极限克隆[J];科学大众(中学版);2009年Z1期
3	吉昌华;苏成芝;;介绍几种PCR产物克隆方法[J];生命的化学;1992年02期
4	姜国忠,谢华,郭玉忠,范天黎,薛乐勋;2种PCR方法扩增盐藻肌动蛋白基因3’旁侧序列比较[J];郑州大学学报(医学版);2004年01期
5	王长太;用细胞培养克隆方法研制新型天花疫苗[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2004年06期
6	陈尚武，马涧泉;PCR产物克隆方法的新进展[J];生物技术;1995年04期
7	李美玲;严成其;王栩鸣;杨勇;余初浪;周洁;程晔;陈剑平;;同源序列法克隆植物抗病基因研究进展及其在野生稻中的应用[J];生物技术通讯;2010年01期
8	李竹红,刘德培,梁植权;改进的反向PCR技术克隆转移基因的旁侧序列[J];生物化学与生物物理进展;1999年06期
9	朱正歌,付亚萍,肖晗,胡国成,斯华敏,于永红,孙宗修;Ac/Ds转座系统在水稻转化群体中的转座活性及转座子插入位点旁侧序列的分析(英文)[J];Acta Botanica Sinica;2003年01期
10	李姗姗,迟彦,李凌飞,马玺,平文祥,于冲,周东坡;启动子克隆方法研究进展[J];中国生物工程杂志;2005年07期

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前10条

1	肖美丽;宋小亚;;大型真菌功能基因克隆研究进展[A];首届全国食用菌中青年专家学术交流会论文集[C];2006年
2	郭先霞;;水稻抗病基因克隆方法及同源类似物全基因组分析[A];中国植物病理学会2006年学术年会论文集[C];2006年
3	朱海红;陈智;刘克洲;陈建忠;周林福;;酵母双杂交系统筛选胸腺肽α1结合蛋白的初步研究[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年
4	王铮;张为民;孟岩;施惠平;黄尚志;;中国人群黏多糖贮积症ⅣA型分子遗传学分析[A];第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编[C];2009年
5	杨英军;周鹏;;番木瓜proteinase omega基因启动子的克隆及序列分析[A];中国遗传学会七届一次青年研讨会暨上海高校模式生物E——研究院第一届模式生物学术研讨会论文汇编[C];2005年
6	田春艳;张令强;贺福初;;新型KRAB型锌指蛋白分子KRANA的功能研究[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
7	蓝秀万;姚姿婷;陈保善;;板栗疫病菌高效同源重组系统的构建[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
8	吴庭才;李银聚;张春杰;程相朝;郑祥海;;鸡IFN-γ基因转录诱导方法及cDNA克隆的比较研究[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（下）[C];2005年
9	郑卫东;刘艳辉;刘辉芳;陈志红;王嬿;;一个遗传性凝血因子Ⅴ缺乏症家系中凝血因子Ⅴ基因两种新突变的鉴定[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年
10	戴军;胡炜;黎双飞;汪亚平;朱作言;;非同源重组方式在外源基因整合中起主要作用:转全鱼基因鲤鱼宿主基因组旁侧序列分离及其特征分析[A];湖北省遗传学会、江西省遗传学会2006年学术年会暨学术讨论会论文摘要集[C];2006年

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前10条

1	曲国斌林小春钱铮;克隆前景喜忧参半[N];西藏日报;2003年
2	邰举;韩雌性克隆狗再获学术界认可[N];科技日报;2006年
3	沈华东;教案巧用克隆造[N];中国电脑教育报;2005年
4	记者曲国斌、林小春、钱铮;多利之死与克隆技术[N];新华每日电讯;2003年
5	记者毛磊段吉勇;美专家用死牛细胞克隆出牛犊[N];新华每日电讯;2002年
6	本报驻华盛顿记者张孟军;克隆技术专利权到底属谁？[N];科技日报;2002年
7	记者王俊鸣;美培育出首例双基因克隆猪[N];科技日报;2002年
8	艾斯斯;克隆人获准[N];亚太经济时报;2004年
9	四川省冕宁县雅水局子弟校李学昌;为机房插上腾飞的翅膀（上）[N];中国电脑教育报;2004年
10	张田勘;干细胞研究条条道路通罗马[N];科技日报;2002年

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前10条

1	朱正歌;农杆菌介导的转座子水稻突变体库的构建[D];中国农业科学院;2001年
2	尚超;SH3GL2基因在喉癌中的功能及调控机制的研究[D];中国医科大学;2007年
3	李竹红;用转座子与RNA/DNA嵌合寡核苷酸探讨靶向性基因治疗[D];中国协和医科大学;2000年
4	侯忠诚;IL-2Rα基因体外转录体系的构建及调控机制的研究[D];中国协和医科大学;1993年
5	叶昕;逆转录病毒载体介导的反义人c-myc基因的转移[D];中国协和医科大学;1990年
6	李和伟;人胰腺癌基因治疗的实验性研究[D];中国协和医科大学;1995年
7	王峻峰;生长激素缺乏症的病因学研究[D];中国协和医科大学;1995年
8	白云飞;双链DNA芯片的制备及其应用研究[D];东南大学;2005年
9	孙智婵;甜菜夜蛾与棉铃虫内源性piggyBac转座子的研究[D];南京农业大学;2007年
10	王志云;中华仓鼠卵巢细胞密码子的研究[D];中国协和医科大学;2002年

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前10条

1	张宏;人类基因翻译始末位置旁侧序列特征的初步分析[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
2	马瑜丹;单核细胞增生李斯特菌菌膜形成突变株的筛选[D];上海交通大学;2008年
3	聂淑晶;转基因油菜转化事件特异性检测技术[D];中国农业科学院;2008年
4	周嘉梁;人β1，3-半乳糖基转移酶7的基因克隆表达及其编码蛋白的特征与功能研究[D];苏州大学;2005年
5	黄绿红;拟南芥光周期调控开花突变体的筛选及基因和蛋白质的鉴定分析[D];湖南大学;2008年
6	刘家范;水稻Ac/Ds标签突变体库的构建及其遗传利用[D];扬州大学;2009年
7	刘毅;来自易变山羊草抗禾谷孢囊线虫基因的克隆与序列分析[D];中国科学院研究生院（成都生物研究所）;2006年
8	薄慧杰;转基因油菜检测技术与环境安全性研究[D];西北农林科技大学;2006年
9	焦虎平;细胞外RNA的初步克隆分析及miRNA-483前体相互作用蛋白的筛选[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
10	梁莉芬;不同物种脑中miRNA的克隆及miRNA与物种进化关系初步探讨[D];暨南大学;2007年

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