蝴蝶兰ACC合成酶基因片段的克隆及其反义表达载体的构建

崔波蒋素华马杰张仙云叶永忠

【摘要】：[目的]克隆蝴蝶兰ACC合成酶cDNA片段,构建其反义表达载体。[方法]根据已报道的蝴蝶兰ACC合成酶的基因序列,设计并合成了1对引物,通过RT-PCR以蝴蝶兰总RNA中扩增出ACC合成酶的cDNA片段,将其连接到MD19-T质粒载体上进行测序。用XbaⅠ和SacⅠ对重组质粒和pBI221酶切后连接,构建蝴蝶兰ACC合成酶的反义基因表达载体。[结果]获得了蝴蝶兰ACC合成酶的cD-NA片段,测序结果显示,该片段与参考的已报道序列具有98.92%和76.36%的同源性。通过引入XbaⅠ和SacⅠ酶切位点,进行载体构建,构建了蝴蝶兰ACC合成酶的反义基因表达载体。[结论]成功构建了蝴蝶兰ACC合成酶的反义基因植物表达载体,为进一步研究其对蝴蝶兰花期和生长的影响打下了基础。

【作者单位】：河南农业大学生命科学学院;郑州师范高等专科学校生物工程研究所;
【关键词】： 蝴蝶兰 ACC合成酶 基因克隆 反义基因 植物表达载体构建
【基金】：河南省科技攻关项目(092102110128)
【分类号】：S682.31
【正文快照】：

乙烯是植物激素之一,其主要生理作用是催熟、促衰老和促脱落。乙烯在植物体内的合成途径为Met(蛋氨酸)→SAM(S-腺苷蛋氨酸)→ACC(1-氨基环丙烷羧酸)→乙烯[1]。其中乙烯直接前体ACC的合成及氧化为产生乙烯的限速环节,催化SAM向ACC转化及ACC转化成乙烯的酶分别是ACC合成酶(1-am

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