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《安徽农业科学》 2009年08期
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重金属锌螯合物人工抗原的合成与鉴定

刘丹  赵丽  刘荣堂  李霞  杨慧  张云显  
【摘要】:[目的]合成并鉴定重金属锌螯合物抗原,为制备重金属锌螯合物抗原特异性单克隆抗体和建立快速检测方法奠定基础。[方法]用二喹啉甲酸(BCA)法测定抗原浓度,利用SDS-PAGE电泳定性鉴定半抗原、抗原、KLH和OVA,用石墨炉原子吸收光谱法检测抗原中Zn2+离子的含量。[结果]利用BCA法检测得分离纯化后的Zn-DTPA-OVA、Zn-DTPA-KLH、DTPA-OVA、DTPA-KLH中蛋白的实际浓度依次为:25.155±0.038、4.195±0.014、9.242±0.015、6.609±0.025 mg/m l。最佳反应条件是A液中含有的Zn2+物质的量是B液中含有的DTPA物质的量的5倍;螯合剂物质的量与蛋白中赖氨酸物质的量的比例为2∶1。通过石墨炉原子吸收光谱法检测得Zn-DTPA-OVA、Zn-DTPA-KLH、DTPA-OVA、DTPA-KLH、HEPES中全Zn2+的含量依次为:295.0±0.3、49.5±0.5、0、0、0μg/m l。[结论]抗原合成是成功的。

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