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《安徽农业科学》 2008年03期
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翻白草总DNA的提取与ISSR-PCR体系的建立与优化

罗佶  伍贤进  彭帅  刘选明  
【摘要】:[目的]针对翻白草ISSR的反应特点,建立稳定可靠的ISSR分子指纹标记反应体系,为进一步研究翻白草的居群差异奠定基础。[方法]通过筛选引物并设定影响翻白草ISSR反应的诸因子的不同浓度,检测ISSR不同反应体系的扩增效果;通过分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立翻白草ISSR稳定可靠的反应体系。[结果]首次建立了可用于翻白草ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系,确定了25lμPCR反应体系中各试剂终浓度:1×Buffer缓冲液,1 UTaq DNA聚合酶,2.5 mmol/LMg2+,0.25 mmol/L dNTP,0.4μmol/L引物,DNA模板约20~30 ng,退火温度在50~56℃;实验表明:Taq酶质量、DNA模板品质、退火温度、Mg2+浓度d、NTP浓度均对ISSR反应结果具有较大影响。[结论]所建立的翻白草ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强、重复性好等特点,可以较好地应用于翻白草的居群鉴别及居群分子生态的研究。

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 杨志玲;冯刚利;谭梓峰;栾启福;王承南;;红花石蒜ISSR-PCR反应体系的建立[J];林业科学研究;2006年04期
2 张青林,罗正荣;ISSR及其在果树上的应用[J];果树学报;2004年01期
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4 席嘉宾,郑玉忠,杨中艺;地毯草ISSR反应体系的建立与优化[J];中山大学学报(自然科学版);2004年03期
5 贺佳;丁小余;褚必海;刘冬扬;丁鸽;;泽泻ISSR反应体系的建立与优化[J];南京师大学报(自然科学版);2006年03期
6 周俊亚,宾晓芸,彭云滔,唐绍清;罗汉果ISSR-PCR反应体系的建立[J];广西师范大学学报(自然科学版);2004年03期
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9 李宗菊,熊丽,桂敏,李金泽,刘小莉,刘飞虎;非洲菊基因组DNA提取及ISSR-PCR扩增模板浓度优化[J];云南植物研究;2004年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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2 熊小芳,黄天华,谢庆东,王晓梅,陈桂兰;精子携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达[J];癌变.畸变.突变;2005年03期
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6 倪大虎,向太和,张盘娣,吴家道,杨剑波,贾士荣,余增亮;应用低能离子束将抗菌肽ShivaA基因导入恢复系明恢63的研究(简报)[J];安徽农业科学;2000年04期
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10 陈志宏;黄琳凯;张新全;王志刚;;正交优化法建立沙打旺ISSR-PCR最佳反应体系[J];安徽农业科学;2006年13期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郭昱嵩;王中铎;刘楚吾;陈志明;刘筠;;勒氏笛鲷(Lutjanus russellii)线粒体DNA全序列的测定与分析[A];中国海洋学会2007年学术年会论文集(下册)[C];2007年
2 张虎平;牛建新;王国安;虎海防;马兵钢;朱军;;适于核桃的RAPD-PCR反应体系的建立[A];第三届全国干果生产与科研进展学术研讨会论文集[C];2003年
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4 樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
5 赵博;雷曹奇;陈露娜;柯卫东;王建波;;豆瓣菜种质资源遗传多样性的RAPD和ISSR分析[A];第二届全国水生蔬菜学术及产业化研讨会论文集[C];2007年
6 彭国荣;袁萍;蔡建国;;酚酸类物质在超临界CO_2中洗脱过程的研究[A];上海市化学化工学会2006年度学术年会论文摘要集[C];2006年
7 张焱;何立人;陈咸川;;化湿利水泄浊合剂对高血压病患者血管内皮功能的影响[A];第九次全国中医心病学术研讨会论文精选[C];2007年
8 严家彬;李新辉;吴淑勤;杜合军;;鳜鱼病毒核酸特异片段表达及高效价抗体制备[A];可持续水产养殖——资源、环境、质量——2003水产科技论坛论文集[C];2003年
9 赵晓瑜;柳伟强;李晓霞;;蚯蚓抗菌肽40kDa Fetidin基因的原核表达与复性[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
10 杨桂梅;高洪;徐自忠;花群义;周晓黎;;水泡性口炎病毒和牛病毒性腹泻病毒的检测方法研究[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蒋国芳;蚱总科昆虫线粒体细胞色素b基因序列及系统进化研究[D];陕西师范大学;2000年
2 栾非时;菜豆种质资源遗传多样性的研究[D];东北农业大学;2000年
3 张军科;樱桃(Prunus mahaleb L.)PGIP基因及其启动子克隆[D];西北农林科技大学;2000年
4 吴茂森;大麦黄矮病毒GPV株系复制酶基因介导的抗病毒转基因小麦的研究[D];中国农业科学院;2000年
5 姚乌兰;多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的制备及其基因克隆和表达[D];中国农业科学院;2000年
6 吴健;肝移植病人乙型肝炎病毒再感染的临床和基础研究[D];浙江大学;2001年
7 朱海红;胸腺肽α1对淋巴细胞信号转导分子表达影响的研究[D];浙江大学;2001年
8 林洪丽;人TIMP-1基因克隆、体外肾脏细胞基因转导、转基因小鼠建立及其肾脏表型变化[D];军医进修学院;2001年
9 解新明;蒙古冰草(Agropyron mongolicum Keng)的遗传多样性研究[D];内蒙古农业大学;2001年
10 赵越;氮调控对甜菜(Beta Vulgaris.L)氮同化和蔗糖代谢关键酶的影响[D];湖南农业大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨睿;重庆部分地区奶牛乳房炎细菌调查及对溶菌酶敏感性试验[D];西南大学;2008年
2 彭澍;冠心病与载脂蛋白E基因多态性相关性研究[D];暨南大学;2000年
3 黄志峰;杂合抗菌肽基因MA-E的改建及用一步蛋白纯化克隆系统表达[D];暨南大学;2000年
4 桑红;新生隐球菌产黑素野生株与白化突变株酚氧化酶结构基因(CNLAC1)的比较研究[D];第二军医大学;2000年
5 熊绍虎;人骨形态发生蛋白-2在大肠杆菌中的高效表达[D];第一军医大学;2000年
6 南清振;mRNA差异显示筛选大肠癌相关基因[D];第一军医大学;2000年
7 刘成龙;大鼠脊髓损伤后一氧化氮合酶活性及其基因表达动态变化的研究[D];第一军医大学;2000年
8 鲁峰;Fas介导的病理性瘢痕成纤维细胞死亡信号传递及基因调控的实验研究[D];第一军医大学;2000年
9 马世东;非洲猪瘟的间接ELISA诊断试剂盒的研究[D];新疆农业大学;2000年
10 侯玉峰;新城疫病毒F48E8株F基因的克隆及其在鸡痘病毒中的表达和免疫效果检测[D];南京农业大学;2000年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 周俊亚,宾晓芸,彭云滔,唐绍清;罗汉果ISSR-PCR反应体系的建立[J];广西师范大学学报(自然科学版);2004年03期
2 杨志玲;冯刚利;谭梓峰;栾启福;王承南;;红花石蒜ISSR-PCR反应体系的建立[J];林业科学研究;2006年04期
3 任玉翠,周彦钢,凌文娟,盛清;鱼腥草营养液升白细胞作用的研究[J];预防医学文献信息;1999年01期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 秦卫华,周守标,汪恒英,王晖;石蒜属植物的研究进展[J];安徽师范大学学报(自然科学版);2003年04期
2 柯丽霞,孙叶根,郑艳,张定成;石蒜属三种植物的核型研究[J];安徽师范大学学报(自然科学版);1998年04期
3 席嘉宾,陈平,郑玉忠,杨中艺;中国地毯草野生种质资源调查[J];草业学报;2004年01期
4 乔玉山,章镇,房经贵,沈志军,赵密珍;李种质资源ISSR反应体系的建立[J];果树学报;2003年04期
5 张青林,罗正荣;ISSR及其在果树上的应用[J];果树学报;2004年01期
6 周俊亚,宾晓芸,彭云滔,唐绍清;罗汉果ISSR-PCR反应体系的建立[J];广西师范大学学报(自然科学版);2004年03期
7 李典鹏,张厚瑞;广西特产植物罗汉果的研究与应用[J];广西植物;2000年03期
8 李钧敏,柯世省,金则新;濒危植物七子花DNA的提取及分析[J];广西植物;2002年06期
9 杨志玲,谭梓峰;石蒜资源的开发利用和繁育研究建议[J];经济林研究;2003年04期
10 邓传良,周坚;长筒石蒜花被片DNA的提取及ISSR体系的建立[J];江西农业大学学报;2005年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 李忠超;特有濒危植物八角莲遗传多样性研究[D];浙江大学;2002年
2 张云;油茶遗传多样性及遗传性状的RAPD分析[D];福建师范大学;2003年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李养贤;介绍一些可以互相代用的中药[J];中国兽医学报;1982年04期
2 陈家振;王汝英;;翻白草治疗羊前胃弛缓[J];中兽医学杂志;1984年01期
3 米太岩;安徽中草药易混淆种类的原植物考订[J];安徽农业大学学报;1985年02期
4 黄国杰;;三子二白汤的临床应用[J];中兽医学杂志;1991年04期
5 李仲武;崔新志;徐汝彤;;健脾散加减治疗牛前胃弛缓[J];青海畜牧兽医杂志;1992年04期
6 单玉敏;;中草药防治鸡球虫病[J];中兽医学杂志;1992年04期
7 曹德贵;;耕牛风寒束表兼见胃热腑实证医案[J];中兽医学杂志;1992年01期
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9 邹喻苹,汪小全,雷一丁,裴颜龙,张志宪;几种濒危植物及其近缘类群总DNA的提取与鉴定[J];植物学报;1994年07期
10 姚闻卿!合肥;绿毛龟培育技术[J];安徽林业;1994年03期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
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2 季鹏章;鄢波;张俊;王平盛;包云秀;;茶树杂交品系DNA提取与RAPD扩增研究[A];中国青年农业科学学术年报[C];2002年
3 李晶;沙伟;;苔藓植物总DNA提取方法和条件的研究[A];中国植物学会七十周年年会论文摘要汇编(1933—2003)[C];2003年
4 蔡红;李凡;陈海如;;不同症状矮牵牛植株植原体16S rDNA片段克隆及序列分析[A];第三次全国植物病毒和病毒防治学术研讨会论文集[C];2003年
5 赵守训;叶文才;刘静涵;杭秉茜;殷志琦;汪豪;;对《中国药典(一部)》2000年版内容的几点建议[A];药用植物研究与中药现代化——第四届全国药用植物学与植物药学术研讨会论文集[C];2004年
6 王琦;周玲仙;罗晓东;殷建忠;;翻白草降血糖动物实验研究[A];首届中国西部营养与健康、亚健康学术会议论文集[C];2005年
7 覃玉琼;;翻白草治疗妇科阴痒体会[A];2005全国首届壮医药学术会议暨全国民族医药经验交流会论文汇编[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 赵冬;中草药 学问大 患者抓药须防假[N];市场报;2001年
2 陕西省中医药研究院 洪文旭;治痢止血翻白草[N];中国中医药报;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 巩艳红;毛豹皮樟基因组总DNA的提取及RAPD技术体系的建立[D];四川农业大学;2003年
2 张红芝;翻白草降糖作用及对肝细胞糖代谢影响的研究[D];中国农业大学;2005年
3 洪花;翻白草的降血糖作用及其机制的实验研究[D];延边大学;2006年
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