| | | | | 蛋白激酶C_α在小鼠胚胎干细胞诱导分化为神经样细胞中的表达变化 | | | 高前应;葛坚;王智崇;陈慧怡;黄丹平;袁钊辉 | | | 目的:研究小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)定向诱导分化为神经样细胞过程中蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)的表达变化,探讨可能涉及ESC定向分化的信号机制。方法:ES-D3细胞株用不含小鼠白血病抑制因子(mouse leukemia inhibitory factor,mLIF)的ESC培养液培养4 d,形成胚胎体(embryoid bodies,EBs),再分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径100 mm的培养皿,经5×10-7mol/L维甲酸(retinoic acid,RA)诱导后,用神经特异性烯醇化酶(NSE)和NF-200来鉴定分化细胞的类型,在诱导后第1、3、5、7和14天用Western印迹和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PKCα亚型的表达变化。结果:诱导前免疫组化发现PKCα在ES-D3细胞有广泛的棕黄色的阳性表达,以细胞浆和细胞膜最明显:Western印迹发现PKCα出现一条蛋白印迹条带,分子量约为84 kD;诱导后第3天,NSE和NF-200开始表达,第7天达到高峰:诱导后Western印迹和RT-PCR方法都显示PKCα表达量急剧下降,以后逐渐升高,至第14天基本恢复至正常水平。结论:在RA诱导ESC定向分化为神经样细胞过程中,PKCα有独特的时空表达特点,它可能对ESC的分化有非常重要的调控作用。眼科学报2004;20:107-112.
【作者单位】：中山大学中山眼科中心;中山大学中山眼科中心;中山大学中山眼科中心;中山大学中山眼科中心;中山大学中山眼科中心;中山大学中山眼科中心 广州 510060;广州 510060;广州 510060;广州 510060;广州 510060;广州 510060
【关键词】：胚胎;干细胞;蛋白激酶Cα;细胞分化;神经元
【基金】：国家重点基础研究发展规划项目(973)子项目(G1999054301);国家自然科学基金(30171001,30200306);广东省重点科技攻关项目(A302020101);广东省自然科学基金(990093);广东省教育厅重点实验室建设基金
【分类号】：R329
【DOI】：cnki:ISSN:1000-4432.0.2004-02-013
【正文快照】：
自 Nishizuka 1977年发现蛋白激酶C(protein kinasec,PKc)以来,因其广泛参与细胞信息传递、分泌、离子通道调节、细胞增殖、分化及癌变等一系列与生命现象相关的过程而成为生物界和医学界研究的重点之一。目前发现PKC家族至少有12种亚型〔’一,各亚型显示了不同的酶学特性及不 | | | | | |  推荐 下载CAJ全文  下载PDF全文 | | | CAJViewer7.0阅读器支持所有CNKI文件格式，AdobeReader仅支持PDF格式 | | | | Expression Changes of Protein Kinase C_α during Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells into Neuron-like Cells | | | Qianying Gao;Jian Ge;Zhichong Wang;Huiyi Chen;Danping Huang;Zhaohui Yuan. Zhongshan Ophthalmic Center;Sun Yat-sen University;Guangzhou 510060;China | | | Purpose :To study the expression of protein kinase Cα (PKCα) during differentiation of
mouse embryonic stem cells (ESC)into neuron-like cells in an attempt to elucidate their
role in signaling.
Method :ES-D3 cells were subjected to an 18-day induction procedure which consisted of
4 days of culture as embryoid bodies (EBs) without all-trans retinoic acid (RA) followed
by 14 days of culture in the presence of RA, then the EBs were plated separately onto
gelatin-coated 6-well culture dishes coated glass coverslip for immunohistochemistry,
onto 100-mm-diameter bacteriological (nontissue culture) dish for Western blot assay
and RT-PCR , and were cultivated and collected cells for 1, 3, 5, 7 and 14 days in the
presence of RA.
Results: Staining of PKCα was strong and distributed throughout the cells, especially in the cytoplasm and membrane. Western blot analysis exhibited a band of approximately 84 kD with the antibody specific to PKCα. After induction of RA, PKCα was present in significantly lower levers in induced ESC as compared with that in ES-D3 cells at first, then PKCα isoform was found in slightly higher amounts and resumed on 14th day. Conclusion: This study was characterized the PKCα isoenzyme profile in RA-induced differentiation of ESC into neuron-like cells and suggests that PKCα may play a very important role in differentiation of mouse ESC along the neuronal pathway.
【Keyword】：embryo;stem cells;protein kinase Ca;differentiation;neuron |
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